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摘要: 目的 研制一种新型EP管法输血前血型鉴定技术方法，在战时和自然灾害等突发情况下不需要电力设备和额外试剂即可快速、准确完成血型鉴定，提高野战输血救治的时效性和安全性。方法 采用抗-A、抗-B、抗-D血型单克隆抗体作为正定型试剂，A、B、O型红细胞膜抗原与胶体金试剂按一定比例混合、标记，制备成浓度为5%的免疫胶体金标记的膜抗原作为反定型试剂，将正反定型试剂分别制成试剂爆珠，预置在不同检测管内，使用前捏破爆珠，试剂留在孔内，加入被检样本即可进行血型检测，同时与现有技术方法平行对比测试，评价二者的检测效果。结果 成功建立了EP管法血型鉴定技术平台，每粒爆珠内含有200 μL反应试剂，手工震荡2 min或800~1 000×g离心15 s即可完成检测，操作过程简单快速，克服了目前固相法缺少反定型的弊端，试剂能够常温条件下长期保存，在反定型中增加了O型红细胞膜抗原起到了不规则抗体筛选的作用，结果更加准确可靠。结论 改良EP管法实现了“无试剂血型鉴定”，特别适合战时和突发情况下野外输血前血型检测，值得推广应用。Abstract: Objective To develop a new EP tube method bloodtype quick detection technology without the power equipment and additional reagents before blood transfusion, so as to improve the timeliness and safety of blood transfusion treatment in the case of war and natural disasters.Methods The monoclonal antibodies contained anti-A, anti-B and anti-D were used as the bloodtype active typing reagent, membrane antigens were obtained and mixed with colloidal gold reagent in certain proportion to prepare 5% immunocolloidal gold labeled for ABO reverse typing reagents. The reagents were respectively made into reagent burstbeads and presetted in different detection tubes. The burstbeads were squeezed so the reagents were left in the well before used, then the samples were dropped in and the detection could be carried out. The experiment was compared with the existing technical methods and the detection effects of the two methods were evaluated.Results It successfully established EP tube bloodtype identification technology platform and each bead contained 200 μL of reagent. The detection could be completed by manual shaking for 2 minutes or 800-1 000×g centrifuging for 15 seconds. The technical operation was simple and fast. The reagent could be stored for a long time under normal temperature conditions. The technology overcame the lack of anti-type drawbacks and the misproval of irregular antibody because of the O red blood cell membrane antigen added. The result was more secure and reliable.Conclusion The EP tube burstbeads technical method realized "no additional reagent blood type identification". It was especially suitable for bloodtype detection before transfusion in case of wartime and emergency and worthy of popularization and application.
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Key words:
- field blood transfusion /
- bloodtype detection /
- burstbead technology /
- membrane antigen /
- colloidalgold
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表 1 爆珠试剂凝集反应结果判定标准
反应图 
凝集情况 凝集呈一大块沉积于管底，反应液清亮 凝集呈小块状沉积于管底，反应液清亮 凝集呈碎块状沉积于管底，反应液微红 凝集呈细碎的小凝块，上清发红 凝集呈细沙状，镜下可见零星凝集 肉眼及镜下均无凝集，反应液均匀红色 无凝集，反应液呈透明红色，镜下无细胞 凝集部分呈小块状，多数细胞无凝集 反应强度 4+ 3+ 2+ + w - 溶血 mf w：弱凝集；-：阴性；mf：混合凝集。 
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表 2 最适工作浓度的选择
抗血清用量/μL 正定型全血用量/μL 反定型金标膜抗原用量/μL 25 50 75 100 50 100 150 200 250 50 4+ 3+ 3+ 2+ 2+ 1+ 1+ w w 100 3+ 4+ 4+ 2+ 2+ 3+ 2+ 1+ 1+ 150 2+ 3+ 4+ 4+ 2+ 3+ 4+ 3+ 2+ 200 2+ 3+ 4+ 4+ 2+ 3+ 4+ 4+ 3+
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表 3 反应条件和时间的选择
方式 时间/s 不同震荡频率(次/min)下凝集强度 结果 60 80 100 120 140 震荡 60 + 2+ 2+ 3+ 3+ 振幅2 cm，频率100~120次/min 2 min为宜 120 2+ 3+ 4+ 4+ 4+ 180 3+ 3+ 4+ 4+ 4+ 方式 时间/s 不同离心力(g)下凝集强度 结果 500 800 1 000 1 200 1 500 离心 10 2+ 3+ 4+ 4+ 4+ 800~1 000×g离心15 s为宜 15 3+ 4+ 4+ 4+ 4+ 30 4+ 4+ 4+ 4+ 4+
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表 4 血型鉴定结果判定
正定型 反定型 Rh 血型 出现正反定型不符 单抗+全血 血浆+膜抗原 抗-D 抗-A 抗-B AC BC OC 4+ - - 4+ - 凝集为4+
无凝集为-A 补充相关试验 - 4+ 4+ - - B - - 4+ 4+ - O 4+ 4+ - - - AB Ac：A型红细胞。
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表 5 爆珠试剂与常规试剂稳定性比较
试剂 保存温度 细胞 正定型 反定型 抗-A 抗-B 抗-D 特异性 亲和力 抗-A血清 抗-B血清 凝集时间 凝集强度 常规试剂 4℃ AC 4+ - 4+ 4+ - 混匀2 min或1 000×g离心15 s 4+ BC - 4+ 4+ - 4+ 4+ OC - - 4+ - - - 爆珠试剂 22℃ AC 4+ - 4+ 4+ - 4+ BC - 4+ 4+ - 4+ 4+ OC - - 4+ - - - 37℃ AC 4+ - 4+ 4+ - 4+ BC - 4+ 4+ - 4+ 4+ OC - - 4+ - - -
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表 6 爆珠试剂与临床常用试剂检测灵敏度比较
试剂 正定型 试剂 反定型 标准红细胞稀释倍数 抗血清稀释倍数 4 8 16 32 64 128 8 16 32 64 128 256 抗-A 4+ 3+ 2+ + + w AC 4+ 4+ 3+ 2+ + w A胶体金试剂 4+ 4+ 3+ 2+ + w 抗-B 4+ 3+ 2+ + + w BC 4+ 3+ 2+ + w - B胶体金试剂 4+ 3+ 2+ + w - 抗-D 4+ 4+ 3+ 2+ + + OC - - - - - - O胶体金试剂 - - - - - -
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